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細胞活力檢測

更新時間：2024-09-26

簡要描述：

細胞活力檢測
tunel細胞凋亡檢測服務(wù)利用脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶（TdT）將脫氧核糖核苷酸-熒光素偶聯(lián)物標記到DNA缺口的3'-末端。試劑盒提供實驗所需的全套試劑組分以及優(yōu)化的實驗方案，檢測方便，且適用于熒光酶標儀、熒光顯微鏡、流式細胞儀。熒光信號易于被檢測（Ex/Em = 555nm/565 nm）。

　　MTT全稱為3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3,5-di- phenytetrazoliumromide，化學(xué)名稱： 3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴鹽，商品名：噻唑藍。是一種黃顏色的染料。MTT比色法，是一種檢測細胞存活和生長的方法。其檢測原理為活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍紫色結(jié)晶甲瓚（Formazan）并沉積在細胞中，而死細胞無此功能。在一定細胞數(shù)范圍內(nèi)，MTT結(jié)晶形成的量與細胞數(shù)成正比。二甲基亞砜（DMSO）能溶解細胞中的甲瓚，用酶聯(lián)免疫檢測儀在490nm波長處測定其光吸收值，可間接反映活細胞數(shù)量。

　　細胞凋亡中, 染色體DNA雙鏈斷裂或單鏈斷裂而產(chǎn)生大量的粘性3‘-OH末端，可在脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶（TdT）的作用下，將脫氧核糖核苷酸和熒光素、過氧化物酶、堿性磷酸酶或生物素形成的衍生物標記到DNA的3’-末端，從而可進行凋亡細胞的檢測。由于正常的或正在增殖的細胞幾乎沒有DNA的斷裂，因而沒有3'-OH形成，很少能夠被染色。所以通過TUNEL法，即基因片段末端標記（Fragment End Labeling, FragEL）從而可進行凋亡細胞的檢測。

　　TUNEL法細胞凋亡檢測試劑盒 (橙紅熒光) 利用脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶（TdT）將脫氧核糖核苷酸-熒光素偶聯(lián)物標記到DNA缺口的3'-末端。試劑盒提供實驗所需的全套試劑組分以及優(yōu)化的實驗方案，檢測方便，且適用于熒光酶標儀、熒光顯微鏡、流式細胞儀。熒光信號易于被檢測（Ex/Em = 555nm/565 nm）。

　　細胞活力檢測操作步驟

　　1.收集對數(shù)期細胞，調(diào)整細胞懸液濃度，每孔加入100ul,鋪板使待測細胞調(diào)密度1000- 10000 /孔。

　　2.一定條件培養(yǎng)細胞適當(dāng)時間，至細胞單層鋪滿96孔平底板,加入濃度梯度的藥物。

　　3.適當(dāng)條件培養(yǎng)適當(dāng)時間，倒置顯微鏡下觀察。

　　4.每孔加入10ul MTT溶液，繼續(xù)培養(yǎng)1-4h。若藥物與MTT能夠反應(yīng)，可先離心后棄去培養(yǎng)液，小心用PBS沖2-3遍后，再加入含MTT的培養(yǎng)液。

　　5.終止培養(yǎng)，小心吸去孔內(nèi)培養(yǎng)液。

　　6.每孔加入100ul二甲基亞砜，置搖床上低速振蕩10min，使結(jié)晶物充分溶解。在酶聯(lián)免疫檢測儀OD490nm處測量各孔的吸光值。

　　活力計算：

　　細胞活力（％）=[A(加藥)-A（空白）]/[A（0加藥）-A（空白）]×100

　　A（加藥）：具有細胞、MTT溶液和藥物溶液的孔的吸光度

　　A（空白）：具有培養(yǎng)基和MTT溶液而沒有細胞的孔的吸光度

　　A（0加藥）：具有細胞、MTT溶液而沒有藥物溶液的孔的吸光度

　　細胞活力：細胞增殖活力或細胞毒性活力

　　tunel細胞凋亡檢測服務(wù)應(yīng)用范圍

　　1.抗腫瘤藥物篩選

　　2.細胞毒性試驗

　　3.腫瘤放射敏感性測定

　　細胞活力檢測服務(wù)期限

　　1-2周。

毓秀生物科技（上海）有限公司是一家專注于生物科技前沿技術(shù)研發(fā)和科研技術(shù)服務(wù)的公司，公司建有專業(yè)的分子生物學(xué)、細胞生物學(xué)、組織病理學(xué)實驗室，為眾多生物醫(yī)藥企業(yè)、科研機構(gòu)、醫(yī)院及高校提供分子生物學(xué)、細胞生物學(xué)、病理形態(tài)學(xué)等方面科研服務(wù)。公司核心團隊曾在國內(nèi)外許多優(yōu)秀學(xué)府從事過多年研發(fā)工作，秉承“為客戶創(chuàng)造價值，為員工實現(xiàn)夢想，為社會創(chuàng)造財富"的經(jīng)營理念，堅持以技術(shù)創(chuàng)新為先導(dǎo)，以服務(wù)質(zhì)量為根本，為中國生物醫(yī)藥和科學(xué)研究提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品和技術(shù)服務(wù)。

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